Jaunissement/noircissement membrane sur gélose Sabouraud

Bonjour,

Ce phénomène peut apparaître lorsque les géloses se dessèchent et/ou que les membranes sont exposées trop longtemps à la chaleur.
Je n’arrive pas très bien à voir la profondeur de la gélose sur les photos mais sur celle du milieu j’ai l’impression qu’elle s’est desséchée en bas (on peut voir que la gelose est sèche sur la paroi de la boîte) et le fait que ce ne soit pas uniforme me fait penser que les boites ont pu être plus exposées à la chaleur d’un côté (proximité avec les parois de l’incubateur). 

Vous pouvez essayer d’utiliser des boites remplies avec un volume de milieu plus important et les éloigner des parois de l’incubateur 

Bonjour Merci pour votre retour.

Ce sont des milieux du commerce, les boites sont placées au centre de l'incubateur (20-25°C), le couvercle des boites est maintenu dessus.

Incubateur : Etuve binder KB23.

Hello,

Je suis d'accord avec Jordan et sure à 100% qu'il s'agit d'un assechement de la gelose !

Ceci peut arriver même avec des géloses du commerce dès l'instant où les boites se trouvent dans l'axe du ventilateur de votre etuve ! il me semble bien que binder KB23 est une etuve ventilée...

Ne jamais mettre de boite dans l'axe du ventilateur où elles se dessecheront en un temps record rendant completement impossible tout denombrement ou repiquage à l'issue de la periode d'incubation.

Je ne connais pas votre domaine d'activité mais dans le pharma c'est une approche que nous etions lors de la qualification de l'equipement en parallele de la cartographie.

Le couvercle de la boite n'empeche pas la circulation de l'air (et heureusement d'ailleurs sinon adieu les aérobies), le flux d'air généré par le ventilateur de l'etuve provoque dans quasi 100% des cas cet aspect de gélose quand celles-ci sont placées devant

Bonjour,

Merci pour ce retour. Je fais la même expérience avec une gélose TSA (même géométrie que les sabouraud)+filtre au même endroit de l'enceinte.

A t+5 jours, pas d'assèchement de gélose constatée, pas de coloration non plus. Je vous tiendrai au courant à t+7 jours.

Hello,

Si vous voulez faire un comparatif, il faut tenir compte de tous les parametres sinon votre étude va etre biaisée

Par exemple :

La présence de NaCl dans la composition de la TSA et de dextrose dans celle de SAB peut faire varier le temps d'assechement entre les deux géloses.

Il faut tenir compte du temps entre la fabrication des géloses et le debut d'incubation ... une gélose en presque fin de validité va forcement s'assecher bien plus vite qu'une gelose qui vient d'etre fabriquée (le processus d'assechement démarre dès la fabrication même s'il n'est pas perceptible à l'oeil nu).

Les conditions de stockage (duree et temperature) avant incubation sont également à prendre en compte, des géloses stockées en sachet hermetique ou non vont s'assecher differemment avant l'incubation ; un stockage au frigo ou a temperature ambiante va également influer sur le résultat ...

Bref l'emplacement dans l'etuve n'est que l'etape finale apres avoir verifié et figé les autres parametres 😉 

et aussi, si les boites n'ont pas été detruites, regarder sur la tranche de la boite coté coloration du flitre et à l'opposé, je parie que le niveau de gélose n'est pas équivalent

d'ailleurs je veux bien une photo si c'est possible 😛 

Hello, les anciennes géloses ont été mises en destruction, donc je ne pourrais rien en tirer.

Par contre la gélose TSA de test est toujours dans l'enceinte.

Elle ne montre pas de coloration à t+6 jours (sa composition peut effectivement jouer sur sa vitesse d'assèchement). 

J'ai observé la tranche de la gélose.

On observe effectivement un niveau variable (plus ou moins ténu).

Nous avions qualifié l'enceinte avec les 2 types de géloses et nous n'avions pas observé jusqu'à présent ce phénomène.

On va regarder si on peut moduler la ventilation de l'enceinte et si on peut avoir des géloses plus épaisses. 

Merci pour vos conseils.

en faite ca donne ca (voir photo) quand on regarde sur la tranche - a gauche c'est normal et a droite ca a séché ...

et la coloration du filtre vient des composants de la gélose qui ont migré dans le filtre par dessous