Bonjour à tous,
Nous rencontrons un problème avec C.albicans au laboratoire. Nous réalisons des normes dans lesquelles nous utilisons C.albicans. Pour des problèmes de perte de micro-organismes lors de la réalisation de nos normes, nous avons décidé d'augmenter la DO de la solution mère (tryptone-sel) de C.albicans.
Nous mesurons la DO à 620nm à l'aide d'un spectrophotomètre. Pour choisir la bonne DO, nous avons réalisés plusieurs tests, à plusieurs DO différentes. Pour connaitre le nombre d'UFC/ml dans notre solution mère, nous avons réalisé des dénombrements pour chaque DO mesurée.
Nous avons alors remarqué qu'à partir d'une DO d'environ 1,2 (dilué au 1/2 pour la mesure) et pour n'importe quelle DO supérieure, le dénombrement est le même. Autrement dit, pour n'importe quelle DO supérieur à 1,2, le nombre d'UFC/ml de la solution mère n'augmente pas.
Or, nous avons besoin d'augmenter le nombre d'UFC/ml de la solution mère de C.albicans pour réaliser notre norme.
Est-ce que quelqu'un a déjà rencontré ce problème ou a-t-il une explication/solution ?
Merci de votre aide.
Bonjour,
Je pense que tout d’abord, vous devez connaitre les raisons pour lesquelles vous avez une perte de microorganismes.
Comment gérez vous votre souchier? Conservation, repiquages?
A combien de repiquages travaillez vous?
Avez vous vérifié les caractéristiques de votre spectrophotomètre ?
A partir de quel type de culture effectuez vous vos DO ?
Pour ma part, je travaille en eau physiologique ou diluant pharmacopée pH 7 selon le référentiel. A une DO de 1,2 à la longueur d’onde de 525 nm, le dénombrement est d’environ 5x10E+8 cfu/mL.
Qu’entendez vous par: DO d'environ 1,2 (dilué au 1/2 pour la mesure). Je ne comprends pas pourquoi vous diluez pour la mesure?
J’espère avoir pu vous guider dans votre réflexion.
Diplococcus
Réponse de Lionel Murat sur Linkedin "Il me semble bien qu'avec un spectro, au delà de 1de DO , la linéarité elle est morte."
@diplococcus Merci pour votre réponse, nous pensons que notre perte de micro-organismes est dû au séchage sur surface.
Nos souches sont conservées selon la norme EN 12353. Nous travaillons à 2 repiquages de 48h pour C.albicans. Nous travaillons avec du diluant (tryptone-sel) pH 7.
Quant à nous, a une DO de 1,2 à la longueur d’onde de 620 nm, le dénombrement est d’environ 5x10E+7 cfu/mL tout comme pour une DO de 2,0 et 2.8. Alors qu'a une DO de 0.6, le dénombrement est de 1.5x10E+7 cfu/mL.
On voit bien que malgré l'augmentation de la DO, nous n'avons pas d'augmentation significative du dénombrement. C'est pourquoi nous pensons à un problème de mort cellulaire ou autre.
Pourquoi travaillez vous à une longueur d'onde de 525 nm ?
Nous diluons pour prendre la mesure au spectrophotomètre car à partir de 1, la linéarité de l'absorbance n'est plus bonne. C'est donc pour avoir une valeur inférieur à 1 lors de la mesure.
Réponse d'Aurélie Tirloy sur LinkedIN :
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Exemple : Pierre Barbez devient Pseudo Biodégradable
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