Microbiologie Pharma : Toutes les géloses TSA se valent-elles vraiment ? Réponse ici !

Disclaimer : Cet article n’est pas une publication scientifique revue par des pairs. C’est « juste » un retour d’expérience d’un laboratoire de microbiologie.

L’objectif de cet article est de nous pousser à la réflexion sur nos pratiques. Bonne lecture 😉

Lors de nos visites de laboratoires, on a très souvent entendu “Toutes les géloses TSA se valent, la formule est dans la pharmacopée” 

Eh bien, détrompez-vous !

Et en plus cette fois, nous avons la preuve que toutes les géloses TSA ne se valent pas.

Voyons cela plus en détail dans cet article.

La qualité des géloses : un facteur clé confirmé par une étude chez un leader de l’industrie pharmaceutique

Suite à notre article sur l’impact de l’étalement au râteau sur le dénombrement des microorganismes (perte de 80 % des Gram négatifs après seulement 20 secondes d’étalement), nous avons reçu de nombreux messages.

Un commentaire en particulier a retenu notre attention. il s’agit de celui de Stéphane Guyonnot, de chez Sanofi, qui nous a écrit :

« Nous avons reproduit une étude similaire il y a quelques années sur différents types de TSA : les recouvrements obtenus sur Pseudomonas aeruginosa après 15 secondes d’étalement variaient entre 0 % et 90 % selon le fournisseur.”

Il n’en fallait pas plus pour piquer notre curiosité !

Nous avons contacté Stéphane pour en savoir plus.

Impact de la durée d’étalement sur le dénombrement

On a beaucoup de chance parce que Stéphane est un SuperMicrobiologiste qui aime partager son expérience.

Il nous a livré les résultats d’une étude réalisée en 2020 dans son labo.

Cette étude a été effectuée dans le cadre de la validation d’un fournisseur de souches calibrées utilisées pour les tests de fertilité de milieux de culture.

Lors de cette validation, dans un souci de standardisation, il a voulu vérifier si la durée de l’étalement au râteau avait un impact sur le dénombrement des microorganismes.

Voici les résultats obtenus:

• Souche : Pseudomonas aeruginosa (bactérie Gram – réputée pour être la plus sensible)
  
• 3 essais indépendants, 3 réplicats par essai
  
• Gélose TSA fournisseur A

N° Essai	Étalement 5 sec	Étalement 10 sec	Étalement 15 sec
Essai 1	35	39	0
Essai 2	32	39	0
Essai 3	28	32	0

Ces résultats confirment ce que nous avions observé dans notre article : après 15 secondes de ratissage, on perd toutes les P.aeruginosa.

Deuxième test : Quand une autre gélose change tout

Stéphane ne s’est pas arrêté là.

Il a ensuite testé une gélose TSA d’un autre fournisseur, dont les propriétés différaient (péremption, conditions de stockage, remplissage).

Voici les résultats :

• Souche : Pseudomonas aeruginosa
  
• 3 essais indépendants, 3 réplicats par essai
  
• Gélose TSA fournisseur B

N° Essai	Étalement 5 sec	Étalement 10 sec	Étalement 15 sec
Essai 1	42	40	40
Essai 2	46	44	46
Essai 3	43	41	42

Cette fois-ci, le temps de ratissage n’a plus aucun impact sur le dénombrement.

Le râteau ne serait donc pas (le seul) fautif ?! 

Les propriétés physiques de la gélose font toute la différence

Cela signifie donc que les propriétés de la gélose ont permis aux bactéries (P.aeruginosa) d’être moins stressées par l’étalement, de mieux récupérer pour être capable de pousser.

D’après Stéphane, les propriétés physiques de la gélose jouent un rôle clé.

Une boîte de Petri avec plus de gélose, une aw élevée et de meilleures matières premières offre probablement un environnement moins stressant. Les bactéries résistent alors  mieux à l’étalement et récupèrent plus facilement pour se multiplier.

Conclusion : Challengez vos géloses !

Fabriquer une bonne gélose, ce n’est pas si simple… c’est peut être même le produit le plus complexe à produire en microbiologie.

Comme le montre cette étude, bien qu’elles aient la même “formulation pharmacopée”, ces deux TSA n’offrent pas les mêmes performances.

Fabriquer une gélose c’est un peu comme une recette de cuisine : tout est dans le choix des bons ingrédients et le savoir-faire… Et tout le monde n’est pas un chef trois étoiles !

Ces résultats montrent que le choix d’un fournisseur de milieu de culture n’est pas à prendre à la légère. Si vous voulez aller plus loin, on vous recommande cet article qui explique comment choisir la bonne gélose pour vos contrôles environnementaux.

Encore un grand merci à Stéphane pour ce fabuleux partage d’expérience.

Si comme Stéphane vous avez des retours similaires, n’hésitez pas à nous les transmettre.

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