impact de l'ISO 11133 sur la certification COFRAC des laboratoires de microbiologie

Utilisation de souches de référence dans un laboratoire de microbiologie alimentaire COFRAC

Les normes ISO16140-3 et ISO 11133 imposent aux laboratoires de microbiologie alimentaire de manipuler des souches de microorganismes. Comment s’organisent les laboratoires pour se fournir les souches, pour les conserver et pour les utiliser au quotidien. C’est pour répondre à ces questions que nous avons rencontré Agnès Cazalet, Responsable technique du laboratoire de microbiologie chez RichesMonts.

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Pouvez-vous nous décrire votre laboratoire ?

Notre laboratoire, le LCI, de la société CF&R (Compagnie des Fromages et RichesMonts) est situé sur le site de Brioude, en Haute-Loire.

Il est spécialisé en microbiologie des aliments. Les matrices principalement analysées sont les matrices laitières : en majorité des fromages type pâte pressée (raclette) mais également des laits et crèmes de consommation. Cependant, les échantillons les plus analysés en industrie, donc dans notre laboratoire, sont les prélèvements d’environnement de production, issus des plans de surveillance des systèmes HACCP en place sur chaque site.

Quelles sont les microorganismes que vous recherchez dans votre laboratoire de microbiologie?

L’analyse majoritaire est la recherche de Listeria, selon une méthode alternative de biologie moléculaire : ANSR for Listeria, de NEOGEN. L’autre pathogène recherché est la salmonelle. Diverses flores sont dénombrées, telles : coliformes, E. coli, staphylocoques coagulase positive, flore mésophile à 30°C, levures/moisissures, Pseudomonas, entérobactéries.

Quelles normes suivez-vous ?

Les méthodes d’analyses : les normes de référence ISO et des méthodes alternatives validées AFNOR. Le LCI est accrédité par le COFRAC pour des analyses du guide technique n°59, Analyses de microbiologie des aliments et environnement.

Pour quelles analyses utilisez-vous des souches ? A quelle fréquence ?

Les souches référencées sont utilisées pour les contrôles de performance des milieux utilisés au laboratoire selon l’ISO 11133 et/ou les normes des méthodes d’analyses. Chaque lot de milieu fabriqué est contrôlé en performance et les milieux prêts à l’emploi sont contrôlés une fois par an. D’autres sont utilisées en tant que témoins lorsqu’elles sont décrites dans les normes correspondant aux méthodes pratiquées.

Quels sont les milieux de culture que vous préparez au labo ?

On fabrique essentiellement des tubes de TS (Tryptone Sel) et de temps en temps des milieux agar pour boite de Petri. Le reste de nos milieux sont prêts à l’emploi.

Concrètement comment se passe la gestion des souches ?

Les souches achetées sont gérées en interne dans une souchothèque : elles sont reconstituées, contrôlées à réception, puis placées sur cryo-billes pour congélation et conservation maximale de trois ans.

Pour l’utilisation en tant que témoin dans une méthode, chaque semaine, des souches sont inoculées sur boîte et utilisées selon les méthodes en cours. Pour tous les tests de confirmation, les cultures utilisées doivent avoir 24 ou 48 heures maximum, sinon elles sont repiquées sur un nouveau milieu. Pour ces témoins des tests de confirmation, le qualitatif est suffisant.

Quels sont vos critères pour choisir un fournisseur de souches ?

Pour nous, le critère principal est d’utiliser les souches demandées dans la norme (référencement WDCM – World Data Centre for Microorganisms). Ce qui est également important c’est le nombre de repiquages à l’origine.

Quelle marque de souche utilisez-vous ?

Je me procure l’essentiel de nos souches dans la collection de l’institut Pasteur (CIP). Les souches non trouvées ont été recherchées chez d’autres fournisseurs connus, à savoir les Kwik Stiks de Microbiologics et les BACuali de IELAB.

Le format principal est qualitatif.

Quelques formats quantitatifs sont de temps en temps utilisés notamment pour les vérifications de méthodes selon l’ISO16140-3. Malheureusement ces formats prêts à l’emploi sont encore trop peu adaptés à nos besoins (prix, <5 cfu, protocoles de dilution, etc…).

Qu’attendez-vous des fournisseurs de souches ?

Des souches calibrées à faible concentration, facile à préparer, avec des résultats reproductibles… ahh oui et aussi les correspondances WDCM. Dans le cas des laboratoires accrédités COFRAC, pour une espèce donnée, seule la référence WDCM décrite dans les prescriptions de la norme peut être utilisée, alors s’il vous plait en plus de nous donner l’information sur la collection (exemple : ATCC, NCTC, etc..) pourriez-vous également nous donner la référence WDCM ?

Dernière question, quelles autres technologies utilisez-vous pour vous dans votre labo ?

Nous sommes un « petit » labo et on manque très souvent de place… c’est essentiellement pour cela que nous avons opté pour la solution ANSR qui est très compacte (en plus d’être très sensible). Nous avons aussi une petite pompe péristaltique et un autoclave pour la production des tubes. En ce qui concerne la préparation d’échantillons nous utilisons un diluteur Interscience avec des poches de 3 litres (plus facile pour la manutention) et un broyeur qui vient également de chez Interscience.

Prochaine étape :
En savoir encore plus sur l’utilisation des souches (préparation, calibration, lecture des résultats, etc…). Vous souhaitez partager votre expérience, contactez-nous (pierre@supermicrobiologistes.fr)

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